Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CLIC1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402391-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CLIC1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CLIC1ダブルニカースプラスミド（h）およびCLIC1ダブルニカースプラスミド（h2）は、CLIC1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: CLIC1 抗体 (F-9): sc-374202
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CLIC1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402391-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CLIC1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402391-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CLIC1は、細胞内クロライドチャネル1（chloride intracellular channel 1）をコードしており、可溶性の細胞質因子として存在する形態と、細胞膜に会合してクロライド伝導性、レドックスバランス、細胞内pH調節に影響を与える形態の両方を取り得るメタモルフィックタンパク質です。細胞容積の調節、細胞骨格ダイナミクス、小胞輸送の制御との関連が示されており、酸化ストレス応答や炎症シグナル伝達の文脈で頻繁に研究されています。CLIC1の活性および発現は、免疫細胞の活性化や細胞の形質転換の過程で変化することが報告されており、増殖・遊走・生存プログラムへの寄与を検討する根拠となっています。CLIC1の制御破綻は、がん生物学や神経炎症を含む複数の病態と関連づけられており、ストレス適応およびイオン恒常性経路を解明するための有用な標的とされています。
CLIC1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CLIC1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CLIC1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CLIC1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CLIC1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。