CLC-7 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404550

Visão geral

CLCN7 codifica a CLC-7, um antiportador Cl⁻/H⁺ dependente de voltagem, predominantemente localizado em endossomos tardios e lisossomos, onde sustenta a acidificação das organelas e a homeostase iônica. Ao acoplar o fluxo de cloreto ao gradiente de prótons gerado pela V-ATPase, a CLC-7 regula a capacidade degradativa lisossomal, o tráfego endolisossomal e o funcionamento da via autofagia–lisossomo. A atividade de CLCN7 é particularmente importante em osteoclastos para a acidificação da lacuna de reabsorção e a renovação da matriz óssea, e alterações na fisiologia lisossomal dependente de CLC-7 estão associadas a fenótipos esqueléticos e neurodegenerativos. Essas propriedades tornam CLCN7 um alvo útil para estudar a biologia dos lisossomos, o transporte iônico em membranas intracelulares e as contribuições específicas de tipos celulares para a homeostase dos tecidos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CLC-7 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CLCN7 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CLCN7, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CLCN7 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CLC-7.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CLCN7 para a investigação da sinalização de CLC-7, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CLCN7 críticos para a função CLC-7
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CLCN7 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CLC-7 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CLC-7 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CLCN7. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CLC-7 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CLC-7 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CLCN7 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CLCN7 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.