CLC-7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404550

Panoramica

CLCN7 codifica CLC-7, un antiportatore Cl⁻/H⁺ voltaggio-dipendente localizzato prevalentemente in endosomi tardivi e lisosomi, dove supporta l’acidificazione degli organelli e l’omeostasi ionica. Accoppiando il flusso di cloruro al gradiente protonico della V-ATPasi, CLC-7 regola la capacità degradativa lisosomiale, il traffico endolisosomiale e la funzione della via autofagia-lisosoma. L’attività di CLCN7 è particolarmente importante negli osteoclasti per l’acidificazione delle lacune di riassorbimento e il turnover della matrice ossea, e l’alterazione della fisiologia lisosomiale dipendente da CLC-7 è associata a fenotipi scheletrici e neurodegenerativi. Queste proprietà rendono CLCN7 un bersaglio utile per studiare la biologia dei lisosomi, il trasporto ionico nelle membrane intracellulari e i contributi specifici dei diversi tipi cellulari all’omeostasi tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CLC-7 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CLCN7 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CLCN7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CLCN7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CLC-7.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CLCN7 per lo studio della segnalazione di CLC-7, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CLCN7 critici per la funzione di CLC-7
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CLCN7 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CLC-7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CLC-7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CLCN7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CLC-7 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CLC-7 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CLCN7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CLCN7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.