CLC-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405071
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- CLC-1 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico CLC-1, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
CLC-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-405071 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
CLCN1 codifica o canal de cloreto CLC-1, dependente de voltagem, no músculo esquelético, um determinante fundamental da repolarização da membrana e da estabilidade elétrica por fornecer alta condutância de cloreto em repouso. Ao limitar disparos repetitivos de potenciais de ação e modular a excitabilidade, o CLC-1 sustenta o acoplamento excitação–contração normal e a homeostase das fibras musculares. A atividade de CLCN1 é regulada pela voltagem, pelo cloreto intracelular e por sinais de sinalização que alteram o gating do canal, conectando-o à fisiologia do transporte iônico e ao estado metabólico. Variantes patogênicas ou a desregulação de CLCN1 estão fortemente associadas à miotonia e a fenótipos neuromusculares relacionados, caracterizados por relaxamento muscular prejudicado.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CLC-1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CLCN1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CLCN1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CLCN1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CLC-1.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CLCN1 para a investigação da sinalização de CLC-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CLCN1 críticos para a função CLC-1
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CLCN1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo CLC-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CLC-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CLCN1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo CLC-1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CLC-1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CLCN1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CLCN1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.