CKR-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404160-ACT

CCR3 (CKR-3) codifica um receptor de quimiocinas da superfamília dos GPCR que se liga preferencialmente às eotaxinas (CCL11, CCL24, CCL26) e a outras quimiocinas CC para direcionar a quimiotaxia de leucócitos. A sinalização de CCR3 aciona vias dependentes de Gαi que regulam o fluxo de cálcio, as cascatas PI3K/AKT e MAPK, a ativação de integrinas e a remodelação do citoesqueleto, coordenando a migração e o recrutamento tecidual. Na imunobiologia humana, CCR3 está fortemente associado ao tráfego de eosinófilos e basófilos e contribui para circuitos inflamatórios em barreiras mucosas. A atividade desregulada de CCR3 é frequentemente estudada na inflamação alérgica, na asma e em patologias teciduais impulsionadas por eosinófilos, bem como em modelos de migração celular mediada por receptores.

CKR-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CCR3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CKR-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CCR3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CCR3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CKR-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CCR3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CKR-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CKR-3 em células tumorais com expressão de CCR3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.