citrin Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-424510-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- citrinO plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase citrin (m) e o Plasmídeo Double Nickase citrin (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Slc25a13. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:citrin Anticorpo (D-7): sc-393303
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
citrin Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-424510-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
citrin Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-424510-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O Slc25a13 de camundongo codifica a citrina, um transportador mitocondrial de aspartato–glutamato da membrana interna que sustenta a lançadeira malato–aspartato e conecta o equilíbrio redox citosólico e mitocondrial ao metabolismo intermediário. Ao trocar aspartato e glutamato através da membrana interna, a citrina ajuda a coordenar o metabolismo de aminoácidos, o manejo de nitrogênio ligado ao ciclo da ureia e o fluxo gluconeogênico por meio da disponibilidade de aspartato. A alteração da função de SLC25A13 está associada a fenótipos de desregulação metabólica em sistemas modelo, tornando o Slc25a13 um nó útil para estudar o transporte mitocondrial, o metabolismo energético de hepatócitos e a homeostase sistêmica de nutrientes. Em camundongos, a perturbação do transporte dependente de citrina fornece uma abordagem viável para investigar vias que acoplam a atividade de transportadores mitocondriais ao estado redox e ao metabolismo do nitrogênio.
citrin O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Slc25a13 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Slc25a13. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Slc25a13. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Slc25a13 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.