CIS Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419665-ACT

O gene **Cish** de camundongo codifica a **proteína induzível por citocinas contendo SH2 (CIS)**, um membro da família **SOCS** que atua como um inibidor por retroalimentação da sinalização de receptores de citocinas. A CIS liga-se a complexos de receptores fosforilados e a motivos associados a JAK para atenuar a atividade a jusante da via **JAK/STAT**, e pode promover a degradação mediada por ubiquitina de componentes de sinalização por meio de interações dependentes do **SOCS box**. Por esses mecanismos, a CIS ajuda a ajustar a ativação de células imunes, a hematopoiese e as respostas inflamatórias ao limitar a magnitude e a duração de programas transcricionais induzidos por citocinas. A atividade desregulada de Cish/CIS tem sido associada a alterações na homeostase imune e a fenótipos inflamatórios, tornando-a um ponto útil para estudar a atenuação de sinais e a comunicação cruzada entre vias de citocinas.

CIS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cish sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CIS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cish em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cish, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CIS. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cish nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CIS no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CIS em células tumorais com expressão de Cish silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.