CIITA Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-419390-NIC

CIITA (transativador do complexo principal de histocompatibilidade de classe II) de camundongo é um regulador transcricional mestre que controla a expressão dos genes do MHC classe II e coordena o processamento e a apresentação de antígenos em células apresentadoras de antígeno profissionais. O CIITA integra a sinalização responsiva ao interferon-γ com programas transcricionais que moldam a ativação da imunidade adaptativa, influenciando o priming de células T CD4+ e a vigilância imune. A atividade alterada de CIITA perturba a dinâmica de expressão do MHC II e tem sido associada à desregulação imune e a fenótipos inflamatórios, tornando-o um alvo amplamente utilizado para estudar o controle transcricional da apresentação de antígenos. Vias dependentes de CIITA também são relevantes em modelos de infecção e de imunologia tumoral, nos quais a capacidade de apresentação de antígenos modula o reconhecimento pelo sistema imune.

CIITA O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Ciita em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Ciita. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Ciita. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Ciita interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.