CIITA Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401762-NIC

CIITA (transativador do complexo principal de histocompatibilidade de classe II) é um regulador mestre da expressão dos genes de MHC classe II em células apresentadoras de antígeno, coordenando a transcrição dos loci HLA-DP, HLA-DQ e HLA-DR. Atuando como um coativador que não se liga diretamente ao DNA, o CIITA integra sinais do interferon-γ e de outras vias inflamatórias para montar enhanceossomos com fatores como RFX e NF-Y e para recrutar a maquinaria de modificação da cromatina. Por meio do controle de programas de processamento e apresentação de antígenos, o CIITA molda a ativação inicial (priming) de células T CD4+ e a vigilância imunológica, e alterações na atividade do CIITA têm sido associadas à desregulação imune e à evasão imunológica tumoral. Redes transcricionais dependentes de CIITA desreguladas também são estudadas no contexto de fenótipos inflamatórios e autoimunes e de interações hospedeiro–patógeno.

CIITA O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CIITA em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CIITA. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CIITA. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CIITA interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.