Chx10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401103

概要

VSX2（Chx10）は、眼野（eye field）の規定および網膜前駆細胞の増殖に中心的な役割を果たすホメオボックス転写因子であり、脊椎動物の網膜形成（retinogenesis）において神経発生と細胞運命決定の調整に寄与します。網膜双極神経細胞の発生や神経網膜アイデンティティの維持を制御する転写プログラムを調節し、WNT/β-カテニン、SHH、Notch関連の遺伝子制御などの発生シグナル伝達ネットワークと連携します。VSX2機能の変化は、小眼球症（microphthalmia）や無眼球症（anophthalmia）などの先天性眼奇形と関連づけられており、発現異常は網膜ジストロフィーの機序研究や、幹細胞由来網膜オルガノイドの開発研究においても重要です。DNA結合性の制御因子として、Chx10は眼および神経系モデルにおける分化の軌跡、系譜コミットメント、遺伝子制御ネットワークへの影響を調べる目的で一般的に研究されています。

Chx10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるVSX2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、VSX2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、VSX2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Chx10タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Chx10シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、VSX2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Chx10の機能に不可欠なVSX2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、VSX2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Chx10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびChx10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、VSX2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Chx10 HDRプラスミド（h）および Chx10 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVSX2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVSX2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。