CHST1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403978-ACT

CHST1 codifica a sulfotransferase de carboidratos 1, uma enzima residente no Golgi que transfere sulfato para resíduos de galactose em glicoproteínas e glicolipídios, contribuindo para a biossíntese de glicosaminoglicanos sulfatados e glicoconjugados relacionados. Ao moldar os padrões de sulfatação na superfície celular e na matriz extracelular, CHST1 influencia interações ligante–receptor, adesão de leucócitos e a sinalização de fatores de crescimento/citocinas nas vias de glicosilação e metabolismo de proteoglicanos. Alterações na sulfatação podem remodelar o glicocálix e modular o reconhecimento imune e a migração celular, ligando a atividade de CHST1 a mecanismos relevantes para a inflamação e o comportamento de células tumorais. Assim, CHST1 é de interesse para estudos da regulação dependente de glicanos da sinalização, adesão e interações com o microambiente.

CHST1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CHST1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CHST1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CHST1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CHST1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CHST1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CHST1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CHST1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CHST1 em células tumorais com expressão de CHST1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.