ChemR23 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403033-LAC

CMKLR1 codifica ChemR23, un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) espresso su molteplici popolazioni di cellule immunitarie, che rileva il chemiotattico chemerina (RARRES2) e ligandi correlati per regolare la migrazione direzionale e la segnalazione infiammatoria. L’attivazione di ChemR23 coinvolge le vie canoniche dei GPCR, inclusa l’inibizione del cAMP dipendente da Gαi e la segnalazione a valle MAPK/ERK e PI3K/AKT, che modulano la produzione di citochine, il traffico leucocitario e la sorveglianza immunitaria dei tessuti. Oltre alla chemerina, ChemR23 può rispondere a mediatori lipidici specializzati pro-risolutivi come la resolvina E1, collegandolo a programmi che coordinano l’infiammazione e la sua risoluzione. Un’alterazione della segnalazione CMKLR1/ChemR23 è stata associata a stati infiammatori cronici e a disfunzioni metaboliche, rendendolo un nodo utile per studiare il crosstalk immuno-metabolico e la regolazione dei circuiti infiammatori.

Le particelle di attivazione lentivirale ChemR23 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CMKLR1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ChemR23 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CMKLR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ChemR23. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CMKLR1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.