ChemR23 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403033-ACT

CMKLR1 codifica o ChemR23, um receptor acoplado à proteína G que se liga à chemerina (RARRES2) e ao mediador lipídico pró-resolutivo resolvina E1 para regular a quimiotaxia de leucócitos, a adesão e a ativação da imunidade inata. A sinalização do ChemR23 aciona vias dependentes de Gi que modulam o cAMP, o fluxo de cálcio intracelular e programas downstream de MAPK/ERK e PI3K, moldando o tônus inflamatório e a remodelação tecidual. O eixo CMKLR1 está implicado no tráfego de macrófagos e células dendríticas, na biologia do tecido adiposo e em respostas vasculares, conectando a atividade do receptor a estados inflamatórios crônicos. Alterações na expressão de ChemR23 e na disponibilidade de ligantes têm sido associadas à inflamação metabólica, a condições autoimunes e à dinâmica do microambiente tumoral, tornando-o um nó relevante para a investigação de vias em sistemas celulares humanos.

ChemR23 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CMKLR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ChemR23 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CMKLR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CMKLR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ChemR23. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CMKLR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ChemR23 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ChemR23 em células tumorais com expressão de CMKLR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.