CHCHD2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-412127-LAC-2

O CHCHD2 humano (proteína contendo domínio coiled-coil-helix-coiled-coil-helix 2) codifica uma pequena proteína do espaço intermembranar mitocondrial que contribui para a homeostase mitocondrial, sustentando a fosforilação oxidativa, a arquitetura das cristas e a respiração celular em condições basais e de estresse. O CHCHD2 participa de redes de resposta ao estresse mitocondrial e tem sido associado à regulação do equilíbrio redox e de vias de sinalização relacionadas à apoptose, tornando-se relevante para investigar a comunicação cruzada entre a função mitocondrial e as vias de sobrevivência celular. Perturbações genéticas e funcionais de CHCHD2 estão associadas a fenótipos neurodegenerativos, incluindo a doença de Parkinson e assinaturas relacionadas à disfunção mitocondrial, bem como a perfis bioenergéticos alterados relatados em contextos da biologia do câncer. A edição gênica de CHCHD2 possibilita estudos mecanísticos da dinâmica mitocondrial, do desempenho da cadeia respiratória e de programas transcricionais adaptativos ao estresse em modelos de células humanas, incluindo ensaios de potencial de membrana, produção de EROs (espécies reativas de oxigênio) e mitofagia.

As Partículas de Ativação Lentivirais CHCHD2 (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de CHCHD2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais CHCHD2 (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição CHCHD2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de CHCHD2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo CHCHD2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.