CHAC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-427280-ACT

Chac1 codifica a CHAC1, uma γ‑glutamil ciclotransferase citosólica que degrada a glutationa e modula o equilíbrio redox intracelular. A CHAC1 é induzida pela resposta integrada ao estresse e pela resposta a proteínas mal dobradas, conectando a sinalização de estresse do RE (retículo endoplasmático) à disponibilidade de aminoácidos, ao estresse oxidativo e às decisões de destino celular. Ao reduzir os níveis de glutationa, a CHAC1 pode influenciar a sinalização dependente de ROS e a sensibilidade a vias de peroxidação lipídica, incluindo processos associados à ferroptose. A expressão desregulada de CHAC1 tem sido associada a fenótipos de estresse celular relevantes para a neurodegeneração, a inflamação e a biologia do câncer, tornando o Chac1 de camundongo um alvo útil para estudos mecanísticos de programas transcricionais adaptativos ao estresse.

CHAC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Chac1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CHAC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Chac1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Chac1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CHAC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Chac1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CHAC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CHAC1 em células tumorais com expressão de Chac1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.