CHAC1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403197-ACT

CHAC1（ChaCグルタチオン特異的γ-グルタミルシクロトランスフェラーゼ1）は、ストレス誘導性の酵素であり、グルタチオンを分解することで、レドックス恒常性とアミノ酸代謝、ならびに酸化ストレスや小胞体ストレスに対する細胞の適応を結び付けます。ATF4により駆動される統合ストレス応答（ISR）の下流エフェクターとして、CHAC1は活性酸素種（ROS）のバランス、タンパク質のフォールディング能、そしてストレス関連の細胞運命プログラムに対する感受性に影響を及ぼします。CHAC1発現の変化は、代謝ストレスや炎症を伴うさまざまな状況で報告されており、がん研究や神経変性疾患モデルなどでは、グルタチオン枯渇やフェロトーシス関連経路がしばしば解析対象となります。CHAC1を制御することは、グルタチオン代謝回転がヒト細胞におけるシグナル伝達ネットワーク、ミトコンドリア機能、ストレス応答性の転写プログラムをどのように再構築するかを研究するための、扱いやすいアプローチとなります。

CHAC1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CHAC1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CHAC1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CHAC1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCHAC1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CHAC1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCHAC1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCHAC1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCHAC1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCHAC1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。