CGRP2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401165-ACT

O CALCB humano codifica o peptídeo relacionado ao gene da calcitonina 2 (CGRP2), um neuropeptídeo produzido pela família de genes da calcitonina que sinaliza por meio do complexo receptor de CGRP (CALCRL com RAMP1) para regular vias dependentes de AMPc. O CGRP2 contribui para a comunicação neurovascular ao modular a vasodilatação, o tônus vascular e a sinalização inflamatória neurogênica, e pode influenciar respostas de músculo liso e de células imunes em tecidos periféricos. A desregulação da sinalização da família CGRP tem sido associada a alterações no processamento nociceptivo e na homeostase vascular, tornando o CALCB um alvo relevante para o estudo da biologia de neurônios sensoriais, do crosstalk endotélio–neurônio e de mecanismos de dor inflamatória. No câncer e em outras condições crônicas, mudanças na sinalização de neuropeptídeos podem moldar o microambiente tecidual e vias de resposta ao estresse, sustentando a investigação do CALCB em modelos de comunicação célula–célula.

CGRP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CALCB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CGRP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CALCB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CALCB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CGRP2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CALCB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CGRP2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CGRP2 em células tumorais com expressão de CALCB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.