Plásmido Doble Nickase (h) CEP350: sc-406478-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CEP350 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CEP350 (h) y el plásmido de doble nickasa CEP350 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CEP350. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CEP350 | sc-406478-NIC | 20 µg | $410.00 |
CEP350 (proteína centrosomal 350) es una gran proteína de andamiaje asociada al centrosoma, rica en dominios coiled-coil, que se localiza predominantemente en el centrosoma y el centríolo madre, donde ayuda a organizar la nucleación y el anclaje de microtúbulos. A través de interacciones con factores centrosomales y asociados al Golgi, CEP350 contribuye a la integridad del centrosoma, la organización del huso y procesos relacionados con los cilios que dependen de una función centríolar precisa. La actividad adecuada de CEP350 favorece la progresión del ciclo celular y la estabilidad del genoma al coordinar la duplicación del centrosoma y la dinámica de los microtúbulos mitóticos. La desregulación de la arquitectura del centrosoma y de la organización de los microtúbulos en la que participa CEP350 es relevante para estudios sobre inestabilidad cromosómica y fenotipos celulares asociados a ciliopatías.
CEP350 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CEP350 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CEP350. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CEP350. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CEP350 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.