CENP-S CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-417249

概要

CENPSは、動原体タンパク質S（CENP-S）をコードしており、キネトコアの完全性と正確な染色体分配を支える、構成的動原体関連ネットワーク（constitutive centromere-associated network）の保存的構成要素です。CENP-Sは動原体およびキネトコアの組み立てに関与し、適切な有糸分裂の進行を促進することでゲノム安定性に寄与します。動原体・キネトコア経路の破綻は、染色体不安定性や異数性と密接に関連しており、これらはがん生物学や増殖ストレスの文脈でしばしば研究されています。CENP-Sはまた、複製に伴うDNA損傷応答と有糸分裂の忠実性が交差する領域でも研究対象となっており、欠陥があると細胞が遺伝毒性の攪乱に対して感受性を示すことがあります。

CENP-S CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCENPS遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CENPS内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CENPSのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CENP-Sタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CENP-Sシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CENPS欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CENP-Sの機能に不可欠なCENPSエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CENPSゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CENP-S CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCENP-S CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CENPS遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CENP-S HDRプラスミド（h）および CENP-S HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCENPSホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCENPS標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。