CENP-F Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-402178-LAC

CENPF codifica a CENP-F, uma grande proteína associada ao centrômero/cinetócoro que se acumula no final da fase G2 e atinge um pico na mitose para coordenar o alinhamento dos cromossomos, a sinalização do checkpoint do fuso mitótico e a segregação fiel das cromátides-irmãs. A CENP-F participa da dinâmica de ligação cinetócoro–microtúbulo e conecta a progressão mitótica à organização do envelope nuclear e dos microtúbulos, dando suporte a transições ordenadas do ciclo celular. A expressão alterada de CENPF é frequentemente associada a fenótipos proliferativos e instabilidade cromossômica, tornando-a relevante para estudos de aneuploidia, manutenção do genoma e biologia de células tumorais. Em células humanas, a perturbação de CENP-F afeta o tempo mitótico e vias de congressão cromossômica que são comumente investigadas em pesquisas sobre ciclo celular e câncer.

As Partículas de Ativação Lentivirais CENP-F (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de CENPF numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais CENP-F (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição CENPF, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de CENP-F. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo CENPF e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.