CENP-F Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402178

Visão geral

CENPF codifica a CENP-F, uma grande proteína associada ao cinetócoro que se acumula no fim da fase G2 e durante a mitose e coordena o alinhamento dos cromossomos, a sinalização do checkpoint do fuso e a segregação fiel durante a divisão celular. A CENP-F contribui para a ligação dos microtúbulos aos cinetócoros e sustenta a função do centrossomo e a dinâmica do fuso, conectando-a a vias centrais de progressão mitótica e estabilidade genômica. A desregulação da expressão ou da localização de CENPF está associada à instabilidade cromossômica e a alterações na capacidade proliferativa, características frequentemente investigadas na biologia do câncer. A CENP-F também serve como marcador do estado do ciclo celular e é estudada por seus papéis na arquitetura nuclear e nas respostas ao estresse mitótico em células humanas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CENP-F (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CENPF em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CENPF, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CENPF na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CENP-F.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CENPF para a investigação da sinalização de CENP-F, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CENPF críticos para a função CENP-F
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CENPF para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CENP-F Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CENP-F Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CENPF. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CENP-F Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CENP-F (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CENPF para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CENPF definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.