CENP-A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402359
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- CENP-A O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico CENP-A, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
CENP-A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402359 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
CENPA codifica a CENP-A, uma variante da histona H3 que substitui a H3 canônica nos centrômeros para estabelecer a cromatina centromérica e especificar a identidade do cinetócoro. A deposição e a manutenção de CENP-A são coordenadas com as vias de montagem do centrômero e a progressão do ciclo celular mitótico, sustentando o alinhamento e a segregação corretos dos cromossomos. A perturbação dos níveis de CENP-A ou de sua localização no centrômero desestabiliza a função do cinetócoro, promove instabilidade cromossômica e aneuploidia, e é frequentemente estudada no contexto de defeitos de manutenção do genoma observados em diversos modelos de câncer.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CENP-A (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CENPA em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CENPA, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CENPA na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CENP-A.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CENPA para a investigação da sinalização de CENP-A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CENPA críticos para a função CENP-A
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CENPA para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo CENP-A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CENP-A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CENPA. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo CENP-A Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CENP-A (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CENPA para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CENPA definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.