CEMIP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412779-ACT

CEMIP (hialuronidase 1 indutora de migração celular) codifica uma proteína secretada e intracelular de ligação ao hialuronano que modula o remodelamento da matriz extracelular ao promover a despolimerização e a renovação do hialuronano. Por meio da regulação do metabolismo do hialuronano, o CEMIP influencia a adesão celular, a motilidade e as interações com o estroma, conectando a dinâmica da matriz a processos de sinalização como programas associados à EMT e respostas do microambiente inflamatório. A expressão alterada de CEMIP tem sido associada à progressão tumoral, invasão e potencial metastático em múltiplos contextos de câncer, e também está implicada na fisiopatologia do tecido conjuntivo e da cartilagem por seus efeitos sobre a homeostase da matriz. Essas propriedades tornam o CEMIP um alvo útil para estudar a regulação do comportamento celular dirigida pela MEC, o remodelamento tecidual e fenótipos relevantes para doenças em sistemas modelo humanos.

CEMIP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CEMIP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CEMIP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CEMIP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CEMIP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CEMIP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CEMIP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CEMIP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CEMIP em células tumorais com expressão de CEMIP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.