CEACAM1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417666-ACT

CEACAM1 (molécula de adesão celular 1 relacionada ao antigénio carcinoembrionário) é uma glicoproteína de superfície celular humana da superfamília das imunoglobulinas que medeia adesão homofílica e heterofílica e regula a sinalização através dos seus motivos ITIM citoplasmáticos. Participa na polarização epitelial, na organização das junções apertadas (tight junctions) e no controlo do crescimento dependente de contacto, ao mesmo tempo que modula a ativação de células imunitárias e respostas inflamatórias por vias dependentes de SHP. A CEACAM1 cruza-se com programas de comunicação célula–célula que influenciam a migração, o comportamento angiogénico e a remodelação tecidular, associando o seu estado de expressão à biologia tumoral e à regulação imunitária. A expressão desregulada de CEACAM1 tem sido reportada em múltiplos tipos de cancro e em contextos inflamatórios, tornando-a um alvo útil para estudar sinalização acoplada à adesão e interações com o microambiente.

CEACAM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CEACAM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CEACAM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CEACAM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CEACAM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CEACAM1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CEACAM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CEACAM1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CEACAM1 em células tumorais com expressão de CEACAM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.