CDYL Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-406624-LAC

Il CDYL (chromodomain Y-like) umano è un coregolatore trascrizionale associato alla cromatina che collega il riconoscimento epigenetico alla repressione trascrizionale attraverso interazioni con modificazioni istoniche e fattori di rimodellamento della cromatina. CDYL contribuisce alla formazione dell’eterocromatina e alla regolazione di programmi di espressione genica coinvolti nello sviluppo neuronale, nel controllo del ciclo cellulare e nella differenziazione, modulando gli stati di acetilazione e metilazione degli istoni. Grazie al suo ruolo nella compattazione della cromatina e nel silenziamento trascrizionale, CDYL influenza vie che governano la stabilità del genoma e l’identità cellulare. Un’attività di CDYL disregolata e stati della cromatina alterati sono stati associati a reti trascrizionali aberranti rilevanti per la biologia dei tumori e per fenotipi del neurosviluppo.

Le particelle di attivazione lentivirale CDYL (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CDYL in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CDYL (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CDYL, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CDYL. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CDYL e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.