Cdt1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401014-NIC

O CDT1 humano codifica a proteína Cdt1, um fator essencial de licenciamento da replicação que carrega a helicase MCM2–7 na cromatina durante a mitose tardia e a fase G1, estabelecendo complexos de pré-replicação e assegurando que a replicação do DNA ocorra apenas uma vez por ciclo celular. A atividade de Cdt1 é rigidamente controlada por fosforilação dependente de CDK e por proteólise mediada por ubiquitina via as vias SCF e CRL4–DDB1–Cdt2, integrando o licenciamento das origens de replicação com a sinalização de checkpoints e o contexto da cromatina. A expressão desregulada ou a estabilização de CDT1 promove re-replicação, estresse replicativo e respostas a dano no DNA, associando Cdt1 a fenótipos de instabilidade genômica estudados em biologia do câncer e em outros distúrbios proliferativos. Como um nó no controle de entrada em fase S, Cdt1 é frequentemente analisada em conjunto com geminina (GMNN), componentes do ORC e as vias ATR/CHK1 para dissecar o timing de replicação e a progressão do ciclo celular.

Cdt1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CDT1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CDT1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CDT1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CDT1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.