CDKN1B/Kip1 p27 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400074-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- CDKN1B/Kip1 p27O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase CDKN1B/Kip1 p27 (h) e o Plasmídeo Double Nickase CDKN1B/Kip1 p27 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para CDKN1B. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:CDKN1B/Kip1 p27 Anticorpo (F-8): sc-1641
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
CDKN1B/Kip1 p27 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400074-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CDKN1B/Kip1 p27 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400074-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDKN1B codifica a p27Kip1, um inibidor de quinases dependentes de ciclina que restringe a progressão pelo ponto de controlo G1/S impulsionada por CDK2 e CDK4/6, modulando os complexos ciclina E/A–CDK2 e ciclina D–CDK4/6. A p27 integra sinais mitogénicos e estímulos inibitórios de crescimento para controlar a paragem do ciclo celular, a quiescência celular e a diferenciação, com a sua regulação determinada pela localização subcelular dependente de fosforilação e pela degradação proteassomal mediada por ligases de ubiquitina do tipo SCF. Alterações na expressão ou na estabilidade de CDKN1B estão frequentemente associadas a proliferação desregulada e a um controlo anómalo de checkpoints, tornando-o relevante para estudos de sinalização oncogénica, compromisso de linhagem e respostas ao stress em células humanas.
CDKN1B/Kip1 p27 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CDKN1B em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CDKN1B. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CDKN1B. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CDKN1B interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.