Cdk8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-435217

概要

サイクリン依存性キナーゼ8（Cdk8）は、Mediator複合体に結合するセリン／スレオニンキナーゼであり、転写因子や転写装置の構成要素をリン酸化することで、RNAポリメラーゼII依存的な転写を制御する。マウス細胞においてCdk8は、Wnt/β-カテニン、TGF-β/SMAD、MAPKなどの経路からのシグナルを統合し、細胞周期の進行、分化プログラム、ストレス応答性遺伝子発現を調節する。エンハンサーおよびプロモーター活性を制御することにより、Cdk8は代謝および炎症に関わる転写出力に影響を与え、系譜特異的な転写ネットワークの形成にも関与し得る。CDK8活性の破綻は、がん化や発生過程といった文脈での異常な転写制御と関連づけられており、Cdk8は転写制御機構やシグナル間クロストークを解明するための機構研究において重要な標的となっている。

Cdk8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCdk8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cdk8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cdk8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Cdk8タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Cdk8シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cdk8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Cdk8の機能に不可欠なCdk8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cdk8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Cdk8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCdk8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cdk8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Cdk8 HDRプラスミド（m）および Cdk8 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCdk8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCdk8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。