Cdk6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400309

概要

CDK6はサイクリン依存性キナーゼ6（Cdk6）をコードしており、これはD型サイクリンと複合体を形成してRBファミリータンパク質をリン酸化し、細胞周期のG1期からS期への進行を促進するセリン／スレオニンキナーゼです。Cdk6の活性は、サイクリンD–CDK4/6–RB–E2F軸を介して増殖シグナルとチェックポイント制御を統合し、増殖・分化・老化を制御する経路とも連携します。CDK6の発現やシグナル伝達の異常は、がんにおける細胞周期制御の破綻としばしば関連しており、造血系の系譜決定や炎症性の転写プログラムにも関与するとされています。細胞周期への進入を協調的に制御する中心的役割を担うことから、CDK6は腫瘍生物学、幹／前駆細胞の制御、ならびに経路レベルでの治療抵抗性機構の研究において広く解析されています。

Cdk6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCDK6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CDK6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CDK6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Cdk6タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Cdk6シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CDK6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Cdk6の機能に不可欠なCDK6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CDK6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Cdk6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCdk6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CDK6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Cdk6 HDRプラスミド（h）および Cdk6 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCDK6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCDK6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。