Cdk4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400148

概要

CDK4はサイクリン依存性キナーゼ4（Cdk4）をコードしており、G1期の中核的な制御因子としてD型サイクリンと複合体を形成し、RBファミリータンパク質をリン酸化することで、S期への進入に必要なE2F依存性転写を促進します。Cdk4活性は増殖因子（マイトジェン）シグナルやCDKN2A/p16などのCDK阻害因子によって制御され、MAPK/ERK経路およびPI3K–AKT経路からの入力を細胞周期へのコミットメントに統合します。CDK4–サイクリンD–RB軸の制御異常は、腫瘍生物学および発生生物学のさまざまな文脈において、異常増殖やチェックポイント制御の変化としばしば関連します。細胞周期の結節点となるキナーゼとして、CDK4は増殖、細胞老化、系譜決定、ストレス応答における役割の観点から日常的に研究されています。

Cdk4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCDK4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CDK4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CDK4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Cdk4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Cdk4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CDK4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Cdk4の機能に不可欠なCDK4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CDK4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Cdk4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCdk4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CDK4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Cdk4 HDRプラスミド（h）および Cdk4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCDK4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCDK4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。