CDC42 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418353-ACT

CDC42 codifica uma pequena GTPase da família Rho, expressa de forma ubíqua, que atua como um interruptor molecular no controle da remodelação do citoesqueleto de actina, da polaridade celular, do tráfego vesicular e da progressão do ciclo celular. Ao alternar entre estados ligados a GDP e a GTP, a CDC42 coordena a sinalização por meio de efetores como PAKs, WASP/N-WASP e o complexo de polaridade PAR, conectando sinais de receptores à dinâmica do citoesqueleto e a programas transcricionais. A atividade de CDC42 cruza-se com vias como PI3K–AKT, MAPK e a adesão mediada por integrinas para regular migração, endocitose e integridade das junções. A desregulação da sinalização de CDC42 tem sido associada a alterações na função de células imunes, anormalidades do neurodesenvolvimento e fenótipos oncogênicos caracterizados por motilidade e invasão aberrantes.

CDC42 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDC42 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CDC42 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDC42 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDC42, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CDC42. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDC42 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CDC42 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CDC42 em células tumorais com expressão de CDC42 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.