Cdc25A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400345

Visão geral

CDC25A codifica a fosfatase humana de dupla especificidade Cdc25A, um ativador-chave de quinases dependentes de ciclina que promove a progressão do ciclo celular ao desfosforilar resíduos inibitórios de CDKs na transição G1/S e durante a entrada na fase S. Sua atividade é rigidamente controlada por sinalização de checkpoints, incluindo as vias ATR/ATM–CHK1/CHK2, que regulam a estabilidade de CDC25A em resposta a estresse de replicação e dano ao DNA. Ao acoplar a sinalização proliferativa à vigilância da integridade do genoma, a Cdc25A influencia o timing da replicação do DNA, a recuperação de checkpoints e a competência mitótica. A expressão ou o turnover desregulados de CDC25A têm sido associados à proliferação aberrante e à instabilidade genômica, tornando-o um alvo frequente em estudos de sinalização oncogênica, defeitos de checkpoint e mecanismos de doença impulsionados pelo ciclo celular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Cdc25A (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CDC25A em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CDC25A, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CDC25A na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Cdc25A.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CDC25A para a investigação da sinalização de Cdc25A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CDC25A críticos para a função Cdc25A
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CDC25A para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Cdc25A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Cdc25A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CDC25A. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Cdc25A Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Cdc25A (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CDC25A para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CDC25A definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.