Cdc20 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400583-ACT

O CDC20 humano codifica a Cdc20, um coativador essencial do complexo promotor da anáfase/ciclossoma (APC/C), que controla a transição de metáfase para anáfase ao promover a degradação, mediada por ubiquitina, de reguladores mitóticos-chave, incluindo securina e ciclina B. A Cdc20 integra a sinalização do checkpoint de montagem do fuso por meio de interações com MAD2, BUBR1 e BUB3, para garantir a segregação correta dos cromossomos e manter a estabilidade genômica. A expressão desregulada de CDC20 ou o bypass do checkpoint podem contribuir para instabilidade cromossômica e proliferação aberrante, tornando-o um alvo frequentemente estudado nas vias de controle do ciclo celular e de fidelidade mitótica. Estudos centrados em CDC20 são amplamente utilizados para investigar a dinâmica do APC/C, a proteostase durante a mitose e os mecanismos que ligam erros mitóticos a fenótipos de instabilidade genômica.

Cdc20 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDC20 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cdc20 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDC20 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDC20, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cdc20. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDC20 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cdc20 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cdc20 em células tumorais com expressão de CDC20 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.