Cdc2 p34 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419582

概要

Cdk1はサイクリン依存性キナーゼであるCdc2 p34をコードしており、細胞周期進行の中核的な駆動因子として、有糸分裂への進入を制御し、複数の基質をリン酸化することで各種チェックポイントを統合的に調節します。サイクリンとの複合体として働くCDK1は、中心体ダイナミクス、染色体凝縮、核膜崩壊、紡錘体形成を制御し、ATM/ATR介在性のDNA損傷応答や複製ストレス経路からのシグナルを統合します。CDK1活性はゲノム安定性と増殖能を制約するため、CDK1–サイクリン軸の制御異常は、過増殖表現型、異数性、腫瘍に伴う細胞周期の再配線にしばしば関与します。そのためマウスのCdk1モデルは、発生や疾患関連の文脈において、有糸分裂制御、チェックポイントの忠実性、複製から有糸分裂への移行に関わる保存された機構を解明する目的で広く用いられています。

Cdc2 p34 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCdk1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cdk1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cdk1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Cdc2 p34タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Cdc2 p34シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cdk1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Cdc2 p34の機能に不可欠なCdk1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cdk1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Cdc2 p34 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCdc2 p34 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cdk1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Cdc2 p34 HDRプラスミド（m）および Cdc2 p34 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCdk1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCdk1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。