CD81 CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-400185-ACT-2

ヒトCD81は、膜マイクロドメインを組織化し、免疫系細胞および非免疫系細胞における受容体クラスター形成、接着、シグナル伝達を制御するテトラスパニン型の細胞表面タンパク質をコードする。CD81はCD19/CD21とともにB細胞共受容体として機能し、インテグリン依存的なトラフィッキングを調節するとともに、抗原提示、細胞活性化、ならびに小胞／エクソソーム生合成を制御する経路に影響を与える。CD81の発現量や細胞内局在の破綻は免疫シグナルの変調や腫瘍細胞の挙動変化と関連づけられており、免疫学・腫瘍学研究におけるマーカーおよび機序解明の要所としての有用性を支持している。さらにCD81は、膜タンパク質複合体の解析、細胞外小胞の特性評価、そしてテトラスパニンネットワークが侵入や細胞間伝播を支配する病原体—宿主相互作用の研究で広く用いられている。

CD81 CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CD81の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD81 CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における CD81 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCD81転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD81の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCD81遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD81依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCD81発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD81経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。