CD77 synthase Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404828-ACT

A4GALT codifica a sintase de CD77, uma glicosiltransferase localizada no complexo de Golgi que catalisa a adição de galactose à lactosilceramida para gerar globotriaosilceramida (Gb3/CD77), um glicoesfingolipídeo neutro essencial. Ao modular a biossíntese de glicoesfingolipídeos, a sintase de CD77 influencia a organização de microdomínios de membrana, o tráfego de proteínas e processos de reconhecimento célula–célula relevantes para a biologia de células imunes e epiteliais. Alterações na atividade de A4GALT e na abundância de CD77/Gb3 têm sido associadas a mudanças no estado de diferenciação e na suscetibilidade a interações dependentes de glicanos, incluindo vias implicadas na biologia de células B e em fenótipos de glicosilação associados a tumores. Como resultado, A4GALT é frequentemente estudado no contexto do metabolismo de glicoesfingolipídeos, da remodelação do glicoma e da regulação de antígenos na superfície celular.

CD77 synthase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de A4GALT sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD77 synthase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus A4GALT em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição A4GALT, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD77 synthase. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus A4GALT nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD77 synthase no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD77 synthase em células tumorais com expressão de A4GALT silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.