CD64 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420305-ACT

O gene **Fcgr1** de camundongo codifica o **CD64 (FcγRI)**, um receptor de alta afinidade para IgG que é expresso predominantemente em monócitos, macrófagos e células dendríticas, onde conecta o reconhecimento de complexos imunes à fagocitose, à explosão oxidativa e à produção de citocinas. O CD64 sinaliza por meio do motivo **ITAM** da cadeia γ do FcR para engajar as vias **SYK**, **PI3K**, **MAPK** e **NF-κB**, integrando a ativação da imunidade inata com a captação e o processamento de antígenos. Como regulador de funções efetoras dependentes de anticorpos, o **Fcgr1** é amplamente estudado em contextos inflamatórios e autoimunes, em modelos de infecção e na biologia mieloide associada a tumores, nos quais alterações na expressão de CD64 podem refletir estados de ativação modificados e diferenciação mieloide. Seu papel no manejo de complexos imunes também relaciona o **Fcgr1** ao crosstalk com o complemento, à endocitose mediada por Fc e a programas transcricionais a jusante que moldam a inflamação tecidual.

CD64 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Fcgr1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD64 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Fcgr1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Fcgr1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD64. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Fcgr1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD64 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD64 em células tumorais com expressão de Fcgr1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.