CD47 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400508-ACT

O CD47 humano codifica uma proteína da superfamília das imunoglobulinas, amplamente expressa na superfície celular, que atua como um sinal de reconhecimento de “próprio” e como receptor de adesão. O CD47 interage com o SIRPα em células mieloides para modular a fagocitose e a vigilância imune, e também se liga à trombospondina-1 para influenciar a sinalização de integrinas, a dinâmica do citoesqueleto e a migração celular. Por meio dessas interações, o CD47 contribui para processos como o tráfego de leucócitos, a biologia vascular e plaquetária e a regulação de respostas inflamatórias. A expressão desregulada de CD47 tem sido associada a alterações nas interações tumor–sistema imune, a neoplasias hematológicas e a patologias inflamatórias ou fibróticas, o que o torna um alvo frequente em estudos mecanísticos de evasão imune e de remodelamento do microambiente tecidual.

CD47 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD47 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD47 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD47 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD47, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD47. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD47 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD47 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD47 em células tumorais com expressão de CD47 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.