CD45RC CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400245-ACT

PTPRCは、造血系細胞における抗原受容体シグナル伝達の閾値を調節する、白血球共通抗原（CD45）受容体型プロテインチロシンホスファターゼのアイソフォームであるCD45RCをコードします。CD45RCは、Srcファミリーキナーゼの主要部位を脱リン酸化し、下流のMAPK、PI3K/AKT、JAK/STAT経路の活性を調節することで、T細胞活性化、サイトカイン応答、免疫恒常性に影響を与えます。PTPRCの選択的スプライシングにより、細胞外ドメインが異なるCD45アイソフォームが産生され、リンパ球の分化やサブセット特異的な機能を規定します。CD45シグナル伝達やアイソフォーム比の破綻は、免疫シグナルの変化が病態形成に関与する自己免疫、炎症性疾患の機序、血液悪性腫瘍の生物学の研究において重要です。

CD45 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PTPRCの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD45 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PTPRC 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPTPRC転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD45の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPTPRC遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD45依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPTPRC発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD45経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。