CD45 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-400245-LAC-2

O PTPRC humano codifica o CD45, uma fosfatase de tirosina do tipo receptor expressa na maioria das células hematopoéticas, que ajusta os limiares de sinalização ao desfosforilar substratos-chave nas cascatas de receptores imunes. O CD45 é um regulador central da sinalização do receptor de células T e do receptor de células B por meio da modulação de quinases da família Src (por exemplo, LCK, FYN), influenciando assim a ativação e a diferenciação de linfócitos e as respostas de citocinas. Alterações na expressão do CD45 ou no uso de suas isoformas estão ligadas à desregulação imune e têm sido associadas a fenótipos autoimunes e à biologia de neoplasias hematológicas, tornando-o um marcador amplamente utilizado para a caracterização de leucócitos. Ferramentas de pesquisa para PTPRC/CD45 dão suporte a estudos de transdução de sinal, controle por retroalimentação dependente de fosfatase e genômica funcional em células imunes primárias e em sistemas-modelo engenheirados.

As Partículas de Ativação Lentivirais CD45 (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de PTPRC numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais CD45 (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição PTPRC, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de CD45. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo PTPRC e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.