CD38 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419548-ACT

O Cd38 de camundongo codifica o CD38, uma ectoenzima multifuncional que catalisa o metabolismo de NAD⁺ para gerar segundos mensageiros como o ADP-ribose cíclico e o NAADP, regulando assim a mobilização intracelular de Ca²⁺. A atividade do CD38 molda a ativação, a diferenciação e a adesão de células imunes e contribui para a homeostase metabólica e redox por meio da modulação de vias de sinalização dependentes de NAD⁺. Nos compartimentos hematopoético e estromal, vias associadas ao CD38 intersectam a sinalização purinérgica, programas transcricionais dependentes de cálcio e redes de citocinas inflamatórias. Alterações na expressão ou na função enzimática do CD38 são amplamente usadas como correlato molecular de desregulação imune, remodelamento metabólico e mudanças associadas ao envelhecimento no turnover de NAD⁺ em modelos murinos de doença.

CD38 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cd38 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD38 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cd38 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cd38, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD38. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cd38 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD38 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD38 em células tumorais com expressão de Cd38 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.