CD37 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404423-ACT

ヒトCD37はテトラスパニンファミリーに属する細胞表面タンパク質で、B細胞および他の白血球サブセットに豊富に発現しており、受容体のクラスター形成やシグナル伝達を協調させる膜マイクロドメインの編成に関与します。CD37は、パートナータンパク質や関連するキナーゼ／ホスファターゼとの相互作用を介して、B細胞受容体（BCR）シグナル、免疫細胞の接着、運動性、抗原刺激に基づく活性化プログラムを調節します。さらにCD37は、リンパ系区画における生存および分化シグナルの制御にも寄与し、B細胞生物学や血液疾患の機序研究の文脈でしばしば解析対象となります。その発現と機能は、免疫微小環境の動態や白血球トラフィッキング経路とも関連しています。

CD37 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CD37の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD37 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CD37 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCD37転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD37の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCD37遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD37依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCD37発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD37経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。