CD300E CRISPR Activationプラスミド (h): sc-415572-ACT

CD300EはCD300ファミリーに属する免疫受容体をコードしており、主に骨髄系細胞で発現し、自然免疫の活性化制御に関与します。CD300Eが刺激されると、炎症性サイトカイン産生、食細胞の活性化、抗原提示細胞の機能を調整するシグナル伝達ネットワークに影響を与え、ITAM関連経路や下流のキナーゼカスケードと連動して、病原体や組織損傷に対する細胞応答を形作ります。骨髄系細胞の活性化状態を調節することから、CD300Eは慢性炎症、自己免疫、腫瘍関連の骨髄系リモデリングにおける免疫調節異常の研究に関連します。その発現動態とシグナル出力は、単球、マクロファージ、樹状細胞における受容体介在性制御を解析するための有用な分子ツールとなります。

CD300E CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CD300Eの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD300E CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CD300E 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCD300E転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD300Eの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCD300E遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD300E依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCD300E発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD300E経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。