CD3-ζ/η Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419556

Visão geral

Cd247 codifica a subunidade de sinalização CD3ζ/η do complexo do receptor de células T (TCR), um adaptador contendo motivos de ativação baseados em tirosina de imunorreceptor (ITAM) que acopla o reconhecimento de antígeno a cascatas intracelulares de fosforilação. Após o engajamento do TCR, os ITAMs de CD3ζ/η recrutam e ativam quinases como LCK e ZAP70, promovendo a montagem do signalossoma LAT/SLP-76 e a ativação das vias MAPK, NF-κB e NFAT, que controlam a ativação das células T, a produção de citocinas e a sobrevivência. Alterações na expressão ou na sinalização de CD247 contribuem para a redução da responsividade das células T e para a desregulação imune, e têm sido associadas a fenótipos inflamatórios e autoimunes, bem como à evasão imune tumoral no microambiente. Em camundongos, a perturbação de Cd247 é amplamente utilizada para investigar a seleção tímica, a tolerância periférica e os estados efetores versus exaustos das células T.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CD3-ζ/η (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Cd247 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Cd247, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Cd247 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CD3-ζ/η.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Cd247 para a investigação da sinalização de CD3-ζ/η, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Cd247 críticos para a função CD3-ζ/η
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Cd247 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CD3-ζ/η Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo CD3-ζ/η Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Cd247. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CD3-ζ/η Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR CD3-ζ/η (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Cd247 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Cd247 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.