CD20 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416765-ACT

MS4A1 codifica o CD20, uma proteína de membrana tetraspânica expressa predominantemente em linfócitos B desde o estágio pré‑B até o estágio maduro e envolvida na regulação da ativação, proliferação e diferenciação das células B. O CD20 contribui para a organização da membrana e para eventos de sinalização associados ao fluxo de cálcio, que moldam respostas transcricionais a jusante durante a ativação induzida por antígeno. Alterações na expressão de MS4A1 e na sinalização dependente de CD20 são frequentemente estudadas no contexto da biologia da linhagem B e da desregulação imune. Como marcador de superfície estreitamente ligado à identidade das células B, o CD20 é amplamente utilizado para investigar vias que governam a homeostase das células B e estados patogênicos dessas células.

CD20 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MS4A1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD20 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MS4A1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MS4A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD20. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MS4A1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD20 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD20 em células tumorais com expressão de MS4A1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.