CD19 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400719-ACT

ヒトCD19は、B細胞に特異的に発現する膜貫通型糖タンパク質であり、B細胞受容体（BCR）複合体における共受容体として機能して、シグナル伝達の閾値を増幅し、抗原依存的な活性化の様式を規定します。CD19はキナーゼやアダプタータンパク質と連携することで、PI3K–AKT、MAPK/ERK、NF-κB各経路の活性を調節し、発生過程および成熟B細胞における増殖・生存・分化プログラムに影響を与えます。その発現動態はB細胞系譜の同一性の定義にも寄与し、胚中心反応や免疫グロブリン産生を含む液性免疫応答を制御します。CD19の発現やシグナル伝達の異常はB細胞恒常性の変化と関連づけられており、B細胞悪性腫瘍や免疫機能異常の文脈でしばしば検討されています。

CD19 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CD19の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD19 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CD19 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCD19転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD19の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCD19遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD19依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCD19発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD19経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。