CD164 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404397-ACT

O CD164 humano codifica uma proteína de superfície celular do tipo sialomucina, altamente glicosilada, que regula a adesão e a migração celulares, bem como o tráfego de células progenitoras hematopoéticas dentro do nicho da medula óssea. O CD164 participa de processos de sinalização próximos à membrana e de endocitose que influenciam interações dependentes de integrinas e o movimento guiado por quimiocinas, com conexões funcionais a vias que controlam a manutenção de células-tronco e comportamentos semelhantes à transição epitélio–mesênquima. Alterações na expressão de CD164 têm sido associadas a mudanças na invasividade de células tumorais e no potencial metastático em múltiplas neoplasias, e ele é frequentemente estudado como marcador de biologia de progenitores e de regulação pelo microambiente. Essas propriedades tornam o CD164 um alvo útil para dissecar mecanismos de adesão ao nicho, motilidade e função de receptores dependente de glicosilação em modelos celulares humanos.

CD164 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD164 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD164 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD164 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD164, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD164. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD164 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD164 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD164 em células tumorais com expressão de CD164 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.