CD155 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404597-ACT

PVR (CD155) é uma molécula de adesão da superfamília das imunoglobulinas, do tipo nectina, que se localiza na membrana plasmática e participa de interações célula–célula, migração e polaridade epitelial. O CD155 interage com receptores imunes, incluindo DNAM-1 (CD226), TIGIT e CD96, associando a expressão de PVR à regulação da atividade de linfócitos citotóxicos e à vigilância imunológica. Funcionalmente, o PVR pode modular a dinâmica do citoesqueleto e redes de sinalização associadas à adesão e à motilidade, e sua desregulação é frequentemente estudada no contexto de interações tumor–sistema imune, invasão e progressão metastática. Além disso, o CD155 atua como receptor do poliovírus, o que o torna relevante para pesquisas sobre mecanismos de entrada viral e interações hospedeiro–patógeno.

CD155 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PVR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD155 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PVR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PVR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD155. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PVR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD155 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD155 em células tumorais com expressão de PVR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.