CD154 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401682-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CD154 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CD154ダブルニカースプラスミド（h）およびCD154ダブルニカースプラスミド（h2）は、CD40LGを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: CD154 抗体 (F-1): sc-374635
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CD154 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401682-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD154 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401682-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD40LGはCD154（CD40リガンド）をコードしており、CD154はⅡ型膜タンパク質として、活性化したCD4+ T細胞上に一過性に発現します。CD154はB細胞、樹状細胞、マクロファージ上のCD40と結合し、獲得免疫と自然免疫のクロストークを協調的に制御します。CD154–CD40シグナルは、NF-κBおよびMAPKにより駆動される転写プログラムを介して、B細胞の活性化、胚中心形成、免疫グロブリンのクラススイッチ組換え、ならびに樹状細胞のライセンシングを促進します。この経路はまた、T濾胞性ヘルパー（Tfh）応答や抗原提示経路におけるサイトカイン産生および共刺激シグナルの形成にも影響します。CD40LGの活性や発現の破綻は、免疫不全や免疫過剰活性化といった表現型と関連しており、液性免疫、炎症、リンパ組織微小環境の制御機構を理解するための研究において重要な標的となります。
CD154 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CD40LG 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CD40LG内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CD40LGの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CD40LGが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。