CD154 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423452

概要

Cd40lg は CD154（CD40リガンド）をコードしており、主に活性化T細胞に発現するII型膜タンパク質である。CD154はB細胞、樹状細胞、マクロファージ上のCD40と結合し、獲得免疫応答を協調的に制御する。CD154–CD40シグナルはNF-κBおよびMAPK経路の活性化を駆動し、サイトカイン産生を促進するとともに、B細胞増殖や胚中心反応を支え、免疫グロブリンクラススイッチにも寄与する。マウスモデルでは、Cd40lg活性の変化が免疫寛容、抗原提示、炎症回路に影響し、自己免疫、感染免疫、腫瘍免疫に関連する現象に関与する。そのため、CD154依存性の共刺激を解明することは、T細胞—抗原提示細胞（APC）間のクロストークやリンパ組織の構築を研究するうえで中心的である。

CD154 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCd40lg遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cd40lg内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cd40lgのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CD154タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CD154シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cd40lg欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CD154の機能に不可欠なCd40lgエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cd40lgゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CD154 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCD154 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cd40lg遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CD154 HDRプラスミド（m）および CD154 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCd40lgホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCd40lg標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。