CD151 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401969-ACT

CD151 (tetraspanina-24) é uma tetraspanina humana de superfície celular que organiza microdomínios enriquecidos em tetraspaninas e modula o tráfego e a sinalização de receptores parceiros, mais notavelmente integrinas ligantes de laminina como ITGA3/ITGB1 e ITGA6/ITGB4. Por meio desses complexos, o CD151 influencia a adesão célula–célula e célula–matriz, a remodelação do citoesqueleto e a migração direcional, impactando processos como a integridade epitelial, respostas angiogênicas e a motilidade de células imunes. A sinalização associada ao CD151 intersecciona com a dinâmica de adesões focais e com vias downstream ligadas à regulação da actina e ao crosstalk entre receptores, moldando o comportamento invasivo em múltiplos contextos celulares. A expressão desregulada de CD151 ou o acoplamento alterado tetraspanina–integrina tem sido associada a fenótipos relevantes para a disseminação de células tumorais, competência metastática e remodelamento vascular em sistemas experimentais.

CD151 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD151 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD151 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD151 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD151, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD151. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD151 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD151 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD151 em células tumorais com expressão de CD151 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.